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Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡

產(chǎn)品時(shí)間:2021-12-21

簡要描述:

INYC00010 Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡
說明: Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍卷膜,0.45 µm,30 cm x 3.3 m
商標(biāo)名: Immobilon
數(shù)量/包裝: 1
應(yīng)用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌轉(zhuǎn)印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析
親水白色光面

品牌Millipore/美國貨號INYC00010
供貨周期現(xiàn)貨應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè),綜合

INYC00010  Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡

Northern 和 Southern Blotting,以及 Colony 和 Plaque Lifts

Millipore 提供了一種用于核酸應(yīng)用轉(zhuǎn)印膜選擇。 使用帶正電的 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜可以在 Southern blotting、Northern blotting 和 colony/plaque lifts 實(shí)驗(yàn)中獲得出色的結(jié)果。 Immobilon-NC Nitrocellulose轉(zhuǎn)印膜,是主要的 Southern 和 colony/plaque 實(shí)驗(yàn)方案中Z初使用的膜,也可作為一種靈敏度較低但更經(jīng)濟(jì)的選擇。
 

說明: Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍卷膜,0.45 µm,30 cm x 3.3 m

商標(biāo)名: Immobilon

數(shù)量/包裝: 1

應(yīng)用: Southern blotting、Northern blotting、菌落/噬菌轉(zhuǎn)印、Dot/Slot blotting 和 DNA 分析

濾膜孔徑,µm: 0.45

相容的染料: Non-applicable

可潤濕性: 親水

主要吸附機(jī)制: 離子,紫外線固定后為共價(jià)的

濾膜尺寸,cm x cm: 30 x 330

替代物: INCP 000 10(核酸應(yīng)用)

濾膜代碼: INYC

濾膜顏色: 白色

產(chǎn)品名稱: Immobilon-Ny+ Transfer Membrane

濾膜表面: 光面

Immobilon-Ny+ 帶正電尼龍轉(zhuǎn)印膜

Immobilon-Ny+ 是一種帶正電的尼龍轉(zhuǎn)印膜,非常適合于可靠與可重現(xiàn)的轉(zhuǎn)移、固定、雜交及隨后的重復(fù)雜交實(shí)驗(yàn)。 其表面均一分布的正電荷密度確保得到Z高的靈敏度和Z低的背景信號。 此膜經(jīng)強(qiáng)化處理具有超長的耐久性,這一點(diǎn)對于重復(fù)雜交試驗(yàn)至關(guān)重要。

可提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,在使用 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜時(shí)可用于優(yōu)化轉(zhuǎn)印結(jié)果。
 

  • 靈敏度Z高,而背景信號Z
     
  • 非常出色的重復(fù)雜交特性
     
  • 在化學(xué)發(fā)光法和放射性檢測系統(tǒng)中均表現(xiàn)出色

INYC00010  Millipore 帶正電尼龍卷膜西方蛋白印跡

性能

Southern Blotting

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直接比較三種帶正電尼龍膜在各自優(yōu)化實(shí)驗(yàn)方案下的表現(xiàn):每種膜在其推薦的紫外波長照射下交聯(lián)。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜的雜交信號是其它兩種膜的 2 倍。

12 次重復(fù)雜交之后的信號強(qiáng)度

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尼龍膜在 254 nm 交聯(lián),并進(jìn)行了多次重復(fù)雜交,依次為:用 32P 標(biāo)記探針做 2 次雜交,4 次模擬雜交,用 32P 標(biāo)記探針做第 7 次雜交,然后進(jìn)行 5 次模擬雜交以及用 32P 標(biāo)記探針做第 13 次雜交。 在每個(gè)雜交周期之間,將膜置于 0.4M NaOH 溶液中,在 45°C 下洗提 30 分鐘。 模擬雜交與真實(shí)雜交*一樣,區(qū)別在于未加 32P 標(biāo)記探針。 在整個(gè)重復(fù)雜交過程中, Immobilon-Ny+ 的信號強(qiáng)度是競爭產(chǎn)品 A 和 B 的兩倍。

檢測靈敏度

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將凝膠上 DNA 的量減少到 0.01 ng。 0.1 lane(條帶)中的 2.2 和 2.0 kbp 帶分別與 DNA 的 0.48 和 0.42 pg 相對應(yīng)。 大約相當(dāng)于 10 µg 人類基因組 DNA 中一個(gè)單拷貝基因序列。 可通過對探針濃度加倍來提高靈敏度。 在 0.01 ng 條帶中,與競爭產(chǎn)品 A 相比,Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜靈敏度稍高,而背景信號更低。

用化學(xué)發(fā)光檢測進(jìn)行 Northern Blotting

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鼠肝的全部 RNA (1 µg) 在甲醛瓊脂糖凝膠中電泳分離,然后通過毛細(xì)作用轉(zhuǎn)印到 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜和競爭產(chǎn)品帶正電尼龍膜 “A”。 與烘焙相比,通過紫外交聯(lián)固定RNA 能增強(qiáng)信號。 Immobilon-Ny+ 轉(zhuǎn)印膜比競爭產(chǎn)品 A 表現(xiàn)出更高的靈敏度。

Colony Lifts

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將載有 pUC19 或 pLH2(2.0  kbp λ 噬菌體 DNA Hind III 片段克隆至 pUC19)的 JM109 混合細(xì)菌懸浮液置于瓊脂培養(yǎng)皿中,在 37°C 下培養(yǎng)過夜。 將培養(yǎng)皿在 4°C 下冷卻30 分鐘,將菌落(直徑大約 1–2 mm)轉(zhuǎn)印至一片 82 mm 直徑的 Immobilon-Ny+ 圓片膜上,或轉(zhuǎn)印至競爭產(chǎn)品帶正電的尼龍膜上。 膜上的 DNA 在254 nm, 60,000 µJoules/cm2 紫外光照射下  交聯(lián)。 然后用 a 32P 標(biāo)記的 DNA 探針對膜進(jìn)行雜交,并使用磷屏成像系統(tǒng)顯色。

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